Conformational analysis of a peptide fragment from first extracelular loop of the receptor human type 1 of angiotensin
Nélida Marín Huachaca1, Clóvis R. Nakaie2 y Shirley Schreier1
1 Departamento de Bioquímica de la Universidade de São Paulo, Av. Prof. Lineu Prestes 748, CEP: 05513-970 São Paulo, Brasil
2 Departamento de Biofísica de la Universidade Federal de São Paulo, Rua 3 de Maio 100, CEP: 04044-020, São Paulo, Brasil.
Recibido el 15 de noviembre del 2017, aceptado el 20 de diciembre del 2017
DOI: https://doi.org/10.33017/RevECIPeru2017.0009/
Resumen
El receptor tipo 1 de angiotensina (AT1) es mediador importante de las funciones vasoconstrictoras de la angiotensina II. Durante el proceso de activación del receptor, éste sufre alteración estructural que conlleva al proceso de transducción de señal. En el presente estudio se investigaron las propiedades conformacionales del fragmento peptídico Ac-YRWPFGNYL-CONH2 (fEC1) correspondiente al primer bucle extracelular del receptor AT1 humano tanto en medio acuoso como en la presencia de sistemas que mimetizan la membrana biológica. De esta manera, se utilizaron micelas y vesículas unilamelares grandes (LUV) -tanto de naturaleza aniónica como zwitteriónica- como sistemas biomiméticos. Las micelas fueron preparadas a partir de los lisofosfolípidos: 1-palmitoil-2-hidroxi-fosfatidilcolina (LPC) y 1-palmitoil-2-hidroxi-fosfatidilglicerol (LPG), mientras que, las LUV fueron preparadas a partir de 1-palmitoil-1-oleoil-fosfatidilcolina (POPC) y 1-palmitoil-2-oleoil-fosfatidilglicerol (POPG). El péptido fue sintetizado por el método de síntesis en fase sólida y los análisis conformacionales fueron realizados mediante dicroísmo circular. Los experimentos fueron realizados en pH 7.0. En este pH la carga teórica de fEC1 es +1. El espectro de dicroísmo circular de fEC1 en solución presentó una banda positiva en aproximadamente 226 nm, mientras que, en la presencia de micelas zwitteriónicas y aniónicas y, en la presencia de LUV aniónicas fueron observadas alteraciones espectrales, esto es, la adquisición de estructura secundaria del péptido como consecuencia de la interacción péptido-sistema biomimético.
Descriptores: Receptor AT1 humano, dicroísmo circular, micelas, vesículas unilamelares grandes
Abstract
The type 1 receptor for angiotensin (AT1) is an important mediator of the vasoconstrictor functions of angiotensin II. During the activation process of the receiver, it undergoes structural alteration that leads to the process of signal transduction. In the present study, the conformational properties of the peptide fragment Ac-YRWPFGNYL-CONH2 (fEC1) corresponding to the first extracellular loop of the human AT1 receptor both in aqueous medium and in the presence of systems that mimics the biological membrane were investigated. In this way, micelles and large unilamellar vesicles (LUV) -both anionic and zwitterionic in nature- were used as biomimetic systems. The micelles were prepared from the lysophospholipids: 1-palmitoyl-2-hydroxy-phosphatidylcholine (LPC) and 1-palmitoyl-2-hydroxy-phosphatidylglycerol (LPG), whereas, the LUV were prepared from 1-palmitoyl- 1-oleoyl-phosphatidylcholine (POPC) and 1-palmitoyl-2-oleoyl-phosphatidylglycerol (POPG). The peptide was synthesized by the solid phase synthesis method and the conformational analyzes were performed by circular dichroism. The experiments were performed at pH 7.0. At this pH the theoretical charge of fEC1 is +1. The circular dichroism spectrum of fEC1 in solution showed a positive band at approximately 226 nm, whereas in the presence of zwitterionic and anionic micelles and, in the presence of anionic LUV, spectral alterations were observed, that is, the acquisition of secondary structure of the peptide as a consequence of the peptide-biomimetic system interaction.
Keywords: Human AT1 receptor, circular dichroism, micelles, large unilamellar vesicles