PRODUCCIÓN IN VITRO DE BRADIZOÍTOS DE NEOSPORA CANINUM #
Risco Castillo, Verónica., Fernández García, Aurora y Ortega Mora, Luis Miguel
DOI: https://doi.org/10.33017/RevECIPeru2004.0012/
RESUMEN
Neospora caninum es un parásito identificado como una de las principales causas de aborto en ganado bovino y de enfermedad neurológica en diversas especies animales. Está íntimamente relacionado a Toxoplasma gondii, con quien comparte la habilidad de persistir indefinidamente, en estado latente y dentro del hospedero, formando quistes tisulares con bradizoítos de lenta división. Aquí comparamos diferentes métodos para inducir la conversión in vitro de los bradizoítos, usando células MARC-145 infectadas con el aislado Nc-Liverpool. La tasa de conversión taquizoíto-bradizoíto fue monitorizada a los días 3, 5 y 7 post-estrés en un ensayo de doble inmunofluorescencia, usando un anticuerpo monoclonal frente al antígeno superficial de taquizoíto SAG1, y el suero policlonal de conejo dirigido contra el antígeno intracitoplasmático de bradizoíto BAG1. El tratamiento durante 7 días con nitroprusiato sódico 70 µM, produjo la mejor tasa de transformación a bradizoíto y la mayor cantidad de vacuolas parasitóforas totales observadas. Presentamos un método alternativo, más venatjoso y simplificado de producción de bradizoítos de N. caninum, usando un sistema de cultivo celular estable y de fácil manejo, con una prometedora capacidad de purificación del parásito.
Palabras clave: Neospora caninum; conversión taquizoíto-bradizoíto; cultivo in vitro
ABSTRACT
Neospora caninum is a parasite identified as a major cause of abortion in cattle and neurological disease in various animal species. It is closely related to Toxoplasma gondii, sharing the ability to persist indefinitely in latent stage within the host as a tissue cyst containing slow-dividing bradyzoites. Here we compared different stress methods to induce in vitro bradyzoite conversion, using MARC-145 cells infected with Nc-Liverpool isolate. The tachyzoite-to-bradyzoite conversion rate was monitored at days 3, 5, and 7 post-stress in a double immunofluorescence assay using a mAb against the tachyzoite antigen SAG1 (aSAG1) and a rabbit serum directed to the intracytoplasmatic bradyzoite antigen BAG1 (aBAG1). Seven-day treatment with sodium nitroprusside 70 µM, offered the highest bradyzoite transformation rate and the best yield of total parasitophorous vacuoles observed. In the present work, we introduce an alternative, simplified and more advantageous method for bradyzoite production of N. caninum, using a reliable cell culture system easy to handle and with promising capacity of parasite purification.
Keywords: Neospora caninum; tachyzoite-bradyzoite conversion; in vitro culture.